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化學發光法hiv檢測ppt

  • 素材大小:4.73 MB
  • 素材授權:免費下載
  • 更新時間:2019-10-05
  • 素材類別:化學課件PPT
  • 素材格式:.ppt
  • 關鍵提要:化學發光法hiv檢測,發光法
  • 素材版本:PowerPoint2003及以上版本(.ppt)
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這是化學發光法hiv檢測ppt下載,主要介紹了免疫標記技術發展;化學發光技術的優勢與應用前景;磁微粒、直接化學發光反應;微粒子化學發光原理;免疫測定試劑的關鍵點,歡迎點擊下載。

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化學發光法hiv檢測ppt

PPT內容

化學發光法檢測傳染病 更靈敏、更特異、更準確免疫標記技術發展 化學發光技術的優勢與應用前景 .敏感度高,(10-21mol/L)超過酶免,熒光免疫等方法 .精密度,準確度超過放免,酶免,熒光免疫等方法 .試劑穩定,無放射性,污染或生物毒性; .測定耗時短,方便快速提供結果報告; .測定項目齊全; 已發展成全自動的測定系統。包被技術的發展---磁微粒子包被磁微粒 標記異魯米諾磁微粒、直接化學發光反應反應充分速度更快磁性微粒子及其分離技術磁性微粒子技術的優點:快速分離結合相與游離相提高與Ag或Ab包被親和力提高接觸表面積/反應容量比例,實現微量分析不需要抗體分離步驟,杜絕干擾與交叉反應允許共價耦合反應,因此可以檢測大/小分子的各種物質成分能應用各種分析設計與反應模式,擴大應用范圍 如:夾心法,竟爭法,抗體檢測法等利于檢測自動化與微量分析磁微粒子直接化學發光是最新一代免疫檢測新技術具有液相、快速、靈敏、準確的特點通過多中心的臨床評估,基本上驗證了LICA在乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、腫瘤標志物、甲狀腺功能等項目的臨床可用性多家臨床試驗顯示產品的質量不亞于進口的雅培、羅氏和西門子等廠家的產品媲美。 1)磁性微粒子技術: 便于分離,反應均勻,提高靈敏度 2)泉涌內外壁清洗技術: 最小的交叉污染率 3)試劑盒蓋設計: 減少人工操作誤差和交叉污染,避免試劑揮發影響結果準確性 4)試劑冷藏系統: 保證在儀器操作的過程中試劑能夠一直保持穩定 5)磁性分離技術: 保證了清洗效率,對于靈敏度要求極高的標記免疫分析是十分關鍵的 AutolumiS2000 免疫項目全自動、管式、直接化學發光法 ---------------特異性強、性能穩定 超長時間無人值守 (1)試劑區15個試劑位, (2)樣本區12 ╳ 12 = 144 個樣本位 (3)碼垛區一次性裝載720個反應杯 測試中可隨時添加,隨時替換管式、微粒子包被技術,反應速度更快,結果更準確。 ELISA法檢測乙肝表面抗原、梅毒、艾滋、丙肝按照2010年《藥典》規定反應時間至少要2小時30分鐘;而全自動微粒子化學發光試劑則不到30分鐘即可完成。穩定性更好特異性更好傳染病試劑傳統酶免法和微粒子化學發光法對比 參比試劑:雅培I2000 免疫測定試劑的關鍵點作為免疫反應,抗原抗體的選擇是整個免疫分析特異性和總體表現的關鍵如何選擇好一個抗體(單克隆或多克隆)去檢測一個被檢物質,而不與非常相似結構的其它代謝產物有交叉反應,或著是一些沒有臨床意義的分解產物等,這是分析設計的重點中之重點。批內、批間的分析重現性。丙型肝炎抗體診斷試劑丙肝診斷試劑目前存在的問題 1、灰區標本的困惑 2、陽性標本的漏檢問題形成的技術原因---灰區的形成 1、重組抗原的原因 (1)融合蛋白 (2)大腸桿菌雜蛋白 2、第二抗體的非特異反應 (1)酶標抗體對固相載體的直接吸附 酶標二抗對于丙肝抗體是非特異的,和各種人IgG均能反應結合。 (2)個別標本中IgG濃度過高 多聚體的混合:E-E、E-Ab、E-Ab-E、E-Ab-E-Ab ,既引起本底背景,又阻遏抗原抗體反應 問題形成的技術原因---陽性標本的漏檢 1、關于靈敏度的兩個概念(1)分析靈敏度 決定因素: a.單個抗原決定族的抗原性強弱。 b.試劑盒的信號放大能力(2)流行病學敏感度 決定因素: a.抗原片段的種類是否齊全。 b.是否含構像抗原。 c.分析靈敏度的高低。 3、包涵體抗原,抗原性弱 4、缺乏構像表位 5、原核表達分子量小,抗原表位有限 6、抗原非糖基化,穩定性差 7、信號放大能力有限 8、固相載體形成的空間位阻威高新型丙肝化學發光試劑的關鍵技術 1、包被和標記實現雙特異,以降低假陽性率,并提高分析敏感度。 2、通過整體系統優化,進一步擴大陰陽反差,使結果判讀涇渭分明。威高新型丙肝化學發光試劑技術策略---灰區的解決 1、酵母真核表達抗原,高效減少灰區標本 eg: E.coli與Pichia pastoris 檢測國標 Anti HCV重組 NS3 抗原 NS3 HCV病毒的最重要的抗原 通過酵母真核系統成功的表達NS3抗原, 多重折疊以達到高度的免疫活性 高純度; 易于直接標記 2、針對Fab端的單特異性抗體標記物 一般二抗和單特異抗體的對比 3、板式固相載體升級為管式磁微粒子包被 ★ 包被量更富足 ★ 管式液相反應更充分 ★ 更有效的解決空間位阻效應 4、光信號檢測,提高信噪比信號放大代替靶標放大,減少靶標放大帶來的非特異性反應,遠遠大于ELISA的信噪比。新型丙肝化學發光試劑---降低漏檢率 1、在CORE、NS3、NS4、NS5的基礎上增加了E1區,保證抗原片段的齊全 2、pichia pastoris表達系統帶來以下優勢 (1)非包涵體而可溶性表達,抗原性強 (2)因糖基化而提高穩定性 (3)分子量大,抗原表位豐富 (4)具有構像抗原表位,而提高檢出率 3、磁微粒子標記抗原增加抗原抗體的反應強度新型丙肝化學發光試劑 檢測國家參考品符合率對比新型雙特異丙肝化學發光診斷試劑 臨床驗證報告丙肝化學發光試劑臨床對比試驗報告對照試劑:雅培I2000SR 試驗單位:包頭市中心醫院定性檢測項目結果判讀-有反應性和無反應性定性項目一般以陰陽性作為結果判斷的基礎。陰陽性判讀基于量化的結果,主觀進行陰陽性的定義。真正的確認的陰陽性需要通過金標準測量方法才能確證。 HCV的確證實驗RIBA(重組免疫印跡法) HIV的確證實驗Western-Blot(蛋白質印跡法)感染初期,可能使用確證實驗也無法得出準確的陰陽性結論。檢驗方法的局限性,使用有反應性和無反應性來評估該樣本針對該檢測方法的檢測結果。半定量檢測,通過病員的動態隨訪,相隔一定時間再行檢測,可通過S/CO值的變化程度來進行確證。降低診斷成本,惠及民生全自動操作,重復性好,易于標準化高特異性、高靈敏度,避免漏檢誤診謝 謝

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